Molekilè metòd rechèch byolojik ak sèvi ak yo

Molekilè byolojik metòd rechèch jwe yon wòl enpòtan nan medikaman modèn, syans legal, ak biyoloji. Mèsi a pwogrè nan etid la nan ADN ak RNA, moun nan se kapab eksplore genomic a nan òganis lan detèmine ajan an responsables, yo rekonèt asid la vle nikleyik nan yon melanj de asid, elatriye

Molekilè-byolojik metòd. Ki sa ki sa li ye?

Retounen nan 70-80s yo nan syantis yo te premye moun ki Decoder genomic imen an. Evènman sa a te bay UN nan devlopman nan jeni jenetik ak molekilè byoloji. te Etid sou pwopriyete ADN ak RNA vle di ke li se kounye a posib yo sèvi ak asid nikleyik sa yo nan bi pou yo dyagnostik maladi, etid jèn.

Preparasyon nan ADN ak RNA

Molekilè byolojik metòd dyagnostik mande pou kòmanse materyèl: souvan sa a asid nikleyik. Gen plizyè fason yo ka chwazi sibstans ki sou sa yo soti nan selil ki nan òganis vivan. Yo chak gen avantaj ak dezavantaj li yo, epi li ta dwe konsidere lè w ap chwazi yon metòd pou izole asid nikleyik nan fòm pi bon kalite.

1. Preparasyon nan ADN pa Marmur. Metòd la konsiste nan trete melanj la nan sibstans ki sou alkòl, presipite ki kapab lakòz pi bon kalite ADN. Inconvénient la nan metòd sa a se itilize nan sibstans ki sou korozivite, PHENOL ak kloroforme.

2. Izolasyon nan ADN sou boom nan. sibstans nan prensipal ki itilize isit la - se gwanidin tyosyanat (GuSCN). Li fè pwomosyon depozisyon an nan asid deoxyribonucleic sou substrats espesyalize, ki soti nan ki li kapab imedyatman ranmase pa vle di nan yon zòn de defans espesyal. Sepandan GuSCN - se yon inhibitor inibitè nan tchp la, e menm yon ti pòsyon nan ki vin depoze nan ADN kapab enfliyanse kou a nan reyaksyon an polimerizasyon chèn, ki se enpòtan lè w ap travay avèk asid nikleyik.

3. Presipitasyon nan enpurte. Metòd la diferan de sa yo ki anvan nan ki molekil sa yo tèt yo pa yo depoze asid dehoksiribonukleinovoy ak enpurte. Pou fè sa, sèvi ak èchanjeur yo ion. Dezavantaj a se ke se pa tout sibstans ki sou ka rezoud.

4. Mass tès depistaj. Metòd sa a se itilize nan ka lè ou pa bezwen gen enfòmasyon egzat sou estrikti a nan molekil la ADN, epi yo bezwen an jwenn kèk Statistik. Rezon ki fè la se ki ka estrikti a asid nikleyik ka domaje lè w ap manyen detèjan, patikilyèman alkali.

Klasifikasyon nan metòd rechèch

Tout metòd molekilè-byolojik nan rechèch yo divize an twa gwoup pi gwo:

. 1. Anplifikasyon (lè l sèvi avèk yon plusieurs nan anzim) Sa a gen ladan PCR - polimerizasyon reyaksyon chèn, ki jwe yon wòl enpòtan nan anpil nan metòd yo dyagnostik.

2. Neamplifikatsionnye. Se gwoup sa a nan metòd ki asosye dirèkteman ak travay la nan melanj asid nikleyik. Men kèk egzanp yo 3 kalite transfèr, nan situ ibridasyon, elatriye

3. Metòd ki baze sou rekonesans an nan siyal la soti nan molekil la pwofonde, ki mare nan yon pwofonde ADN oswa RNA espesifik. Egzanp - sistèm ibridasyon Hybride solisyon Capture System (HC2).

Anzim ki ka itilize nan metòd molekilè rechèch byolojik

Anpil molekilè teknik dyagnostik yo enplike itilizasyon nan gwo ran de anzim. Anba a yo te itilize pi souvan:

1. restriksyon anzim - "koupe" molekil la ADN nan pati ki nesesè yo.

2. polimerizasyon ADN - sentèz yon doub-bloke deoxyribonucleic molekil asid.

3. Fèy transkriptaz (ranvèse transkriptaz) - itilize yo sentèz ADN soti nan yon modèl RNA.

4. ligaz ADN - ki responsab pou fòmasyon an nan obligasyon fosfodyèste ant nucleotides.

5. exonuclease - retire nucleotides soti nan pòsyon yo nan fen molekil nan asid deoxyribonucleic.

PCR - metòd la debaz yo nan anplifikasyon ADN

reyaksyon polimerizasyon chèn (PCR) se lajman ki itilize nan modèn byoloji molekilè. Metòd sa a, nan sa ki ka yon molekil ADN yon sèl ka jwenn yon gwo kantite kopi (anplifikasyon molekil).

Fonksyon prensipal yo nan PCR:

- dyagnostik pou maladi;

- klonaj segments ADN, Gene.

Pou pote soti reyaksyon an polimerizasyon chèn mande pou eleman sa yo: premye molekil ADN, se yon polimerizasyon tèrmostabl ADN (Taq oswa PFU), fosfat dezoksiribonukleotid (sous baz nitwojèn), prime yo (2 Jadendanfan 1 molekil ADN) ak tèt li yon sistèm tanpon ki ka fè tout reyaksyon.

PCR gen ladan twa etap: denaturation, Jadendanfan rkwir ak pwolonjman.

1. denaturation. Nan yon tanperati ki nan 94-95 degre Sèlsiyis proshodit kraze lyezon yo idwojèn ant de chenn yo nan ADN, e kòm yon rezilta nou jwenn de molekil sèl-bloke.

2. rkwit prime. Nan yon tanperati ki nan 50-60 degre santigrad rive prime asansyon nan bout yo nan molekil sèl-bloke asid nikleyik dapre ki kalite konplemantarite.

3. Pwolonjman. Nan yon tanperati ki nan 72 degre se sentèz pitit fi doub bloke molekil asid deoxyribonucleic.

sekans ADN

Molekilè metòd rechèch byolojik souvan mande pou konesans nan sekans nan nucleotides nan yon molekil nan asid deoxyribonucleic. Pou detèmine kòd la jenetik sekans. diagnostics molekilè nan tan kap vini an ap baze sou konesans yo te vin jwenn nan detèminasyon an nan sekans nan imen.

kalite sa yo nan sekans:

• sekans pa Maxam-Gilbert a;
• Sanger sekans;
• Piwosekansaj;
• nanoporovoe sekans.